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核酸電泳

沒有時間倒入自己的瓊脂糖凝膠,制作自己的緩沖液,等待一個多小時才能得到結果?你很幸運,因為核酸電泳每天都變得越來越容易。使用預制凝膠,一體化套件,甚**自動化,您可以完成一項耗時,繁瑣的任務,就像微波爐一袋爆米花一樣簡單 - 并且比祖父在倒回自己的凝膠時更好雖然瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠電泳是可靠的,堅固的技術已經使用了幾十年,但仍然有一些令人驚訝的創新,通過在凝膠盒外思考。

Bio-Rad提供**廣泛的核酸電泳產品系列之一包括用于水平和垂直凝膠電泳的系統,用于脈沖場電泳的CHEF系統,核酸測序,用于突變分析的DCode,印跡系統以及全部選擇的試劑,染色劑和緩沖劑。他們用于常規核酸電泳的所有產品**近都經過升級和優化,以便更快,更方便。“我們盡量讓它變得無痛,”基因表達部門產品經理Veronika Kortisova Descamps說道。“研究人員不必花費任何精力思考他們應該將凝膠放入儀器內的方式。即使修理也很容易:如果它們斷裂,我們的系統需要大約五秒鐘的時間來拆卸和更換電極。“

除了傳統的核酸電泳技術,研究人員正在尋找下一波解決方案,這些解決方案不會占用工作日的大部分時間,或者消耗過多的樣品。為此,Bio-Rad還提供基于微流體的自動電泳解決方案,用于使用Experion™自動電泳系統進行RNA和DNA分析(以及蛋白質)。根據待分離的生物分子,可提供不同的芯片,并且需要非常少的樣品用于分析。例如,RNA芯片可容納少**5 ng的RNA(Experion RNA StdSens分析試劑盒),為下游應用(如RT-qPCR)保存了珍貴的樣品。qPCR的新指南稱為MIQE 1強調RNA質量和完整性的重要性,正在通過科學界滲透。Experion系統可幫助研究人員在進行實驗時符合MIQE指南。2

“在考慮RNA質量時,許多人只關注純度。然而,物理完整性 - 無論分子是否降解 - 是后續實驗成功的重要因素。Experion的RQI(RNA質量指標)工具提供了一種標準化的RNA質量測量方法,規模為1到10“,Bio-Rad實驗室分離部門營銷經理Mary Grace Brubacher說。

Lonza提供一整套核酸和蛋白質電泳解決方案,包括瓊脂糖粉末,預制瓊脂糖凝膠,預制SDS和天然PAGE凝膠,標準品,染色劑和緩沖液。他們的產品專為滿足廣泛的應用和需求而量身定制,從快速簡單的閃光凝膠到支持技術先進應用(如測序和qPCR)的產品。

像Lonza的FlashGel®這樣的超快速凝膠系統是業內**熱門的趨勢之一。其背后的想法是,在您進行下一步之前,一個小的,快速的凝膠分析可以為您提供DNA或RNA的有用快照。FlashGel系統是一個手掌大小的組合電泳盒和transluminator單元。它使用含有預制,預染色凝膠??的預制盒式磁帶。凝膠以275伏特運行,是標準瓊脂糖凝膠推薦的110伏特的兩倍多。“它運行得如此之快,”Mary Riley說,“你可以逐字地觀察樂隊的遷移......對于大多數片段,你會在五分鐘或更短的時間內看到樂隊的明顯分離。對于某些片段,它只需要兩分鐘。“Flash Gel的一個常用用途是快速分析PCR產物,看看反應是否成功。另一個,

近年來,Lonza跟蹤了電泳客戶的增加,以支持下一代測序,qPCR和基因分型。瓊脂糖凝膠電泳是一種多功能的方法,幾乎??可以在每個實驗室中顯示,而SeaKem,NuSieve和Metaphor等Lonza品牌已成為該行業的主要產品。“由于其**的純度,我們的瓊脂糖還用于一些有趣的非電泳應用,例如制藥應用的輸送機制,”Riley說。

即使使用像瓊脂糖凝膠電泳一樣古老而熟悉的技術,仍然可以提出一種完全改變范式的新想法。Faster Better Media(FBM)就是這種情況。該公司圍繞一個簡單的想法組織 - 一個低導電緩沖液,讓您的凝膠在高電壓下運行,因此您可以在凝膠上高分辨率分離DNA條帶,只需花費一小部分時間來運行常規凝膠凝膠。使用FBM的LB緩沖液,可以提高凝膠盒上的電壓,并在十五分鐘或更短的時間內完成整個分析。

經過這么多年的保姆凝膠和過熱的煩惱,許多科學家很難實現過渡。“我們收到一些有趣的電子郵件,人們說,'當我以250伏的電壓運行時,我得到了很好的結果。我們的事情已經達到了300,但我很擔心這么高。“ 我回信說,'去吧!' 并且他們很興奮,他們這樣做并且有效!“喬恩布羅迪博士說,他是'1 Faster Better Media的共同擁有者和共同**。

傳統運行緩沖器中的熱量問題源自緩沖器的tris分量。Tris緩沖液具有高電導率,并產生高電流。高電流增加了緩沖器的熱量和電導,這進一步增加了電流。來自Faster Better Media的**發布的基于鋰的緩沖液電導率低,不會產生這種反饋回路。使用三硼酸鹽EDTA(TBE)或三乙酸乙酯EDTA(TAE)緩沖液進行DNA和RNA電泳是基于傳統,而非**佳效用。直到**近,它才受到質疑。

核酸電泳是一種非常著名的常用技術。然而,因為人們正在以新的方式使用核酸,例如在qPCR和下一代測序實驗中,所以值得再看一下舊的瓊脂糖凝膠,看看你是否仍在充分利用你的設置,你的緩沖液,和你的污漬。

參考文獻:

1 Bustin,SA等,“MIQE指南:發布定量實時PCR實驗的**小信息”。Clin Chem,55,611-22,2009。

2 Taylor,S,et al。,“RT-qPCR發布符合MIQE指南的數據的實用方法”。Bio-Rad Bulletin#5859,2009。